佩恩·杜博伊斯于1899年开始接受艺术训练，当时他进入纽约艺术学院，在画家威廉·梅里特·切斯的指导下学习。1902年，他与罗伯特·亨利一起参加了一个绘画班，他的教导使佩恩·杜博伊斯在自己的作品中更加关注日常生活。佩恩·杜博伊斯于1905年前往欧洲，在西奥菲勒·斯坦伦手下学习，但次年父亲去世后返回美国。
从1906年开始，佩恩·杜博伊斯为《纽约美国人》（New York American）担任插画家和漫画家，两年后他开始为该出版物撰写艺术评论。1913年，他成为《艺术与装饰》（Arts and Decoration）的编辑，还为《纽约邮报》（ New York Post ）和《艺术与艺术周刊》（The Arts and Arts Weekly）杂志撰稿。他也是《现实：艺术家观点杂志》的创办人之一。
1940年，他出版了自传《艺术家说最愚蠢的事》（Reality: A Journal of Artists’ Opinions）。他的儿子是法裔美国作家和插图画家威廉·佩恩·杜博伊斯（William Pène du Bois）。
美国艺术家Jerome Myers在1940年的自传《曼哈顿的艺术家》（Artist in Manhattan）中回忆起他与佩恩·杜博伊斯的亲密友谊：“盖伊·佩内·杜博伊斯（Guy Pene du Bois）长期以来一直是我对艺术和生活的看法的审核员。我们的关系是如此愉快和有利可图。因此，在他迷人的家庭圈子里，我们常常一起喝咖啡，共度数小时，分析艺术状况，预测各种艺术家的职业生涯，然后掌握聚光灯，以及其他光线不那么明亮的人。很遗憾，我没有把我们的谈话记录下来，因为对我来说，谈话总是一种鼓舞。
盖伊当时是著名的艺术评论家和画家；甚至在后来，当他成为著名的画家时，他仍然是艺术评论家，在他的简短格言中加入了世界性的愤世嫉俗、冷静的智慧和枯燥的幽默。我对他出国旅行的干涉感到遗憾，但只要有机会，我们的亲密交谈就重新开始了，这家伙仍然是我真正的精神伙伴。他一直是一位睿智的朋友，一位睿智的老师，一位拥有个人和罕见绘画技巧的人，他的一生是一位杰出的人物，他的人脉是显赫的。我只羡慕他所有的名字和地点的历史，涵盖了我们现在的艺术史。”
他的作品被许多博物馆收藏，包括史密森美国艺术博物馆、国家美术馆、菲利普斯收藏、蒙哥马利美术馆、布鲁克林博物馆、惠特尼美国艺术博物馆、宾夕法尼亚美术学院和弗吉尼亚大学艺术馆。一幅由佩恩·杜博伊斯创作的壁画名为“约翰·杰伊在他的家”于1938年完成，并在WPA时代安装在纽约州黑市的美国邮局。在纽约萨拉托加温泉邮局有一幅盖伊·佩恩·杜博伊斯的壁画，“赛马季节的萨拉托加”1937年，画布油画，两块面板。
